TGIRT-III RTnase具有依賴于DNA/RNA雜交鏈的反轉錄酶活性，其具有強的延伸性能，因此更易快速獲得全長的cDNA能快速合成cDNA，該酶具有強的鏈轉換活性（Switch）。因此，該酶可用于Template-Switching的RNA-seq，如tRNA、ncRNA、miRNA等核酸分子的同步逆轉錄和加接頭（TGIRT template-switching reaction，用于TGIRT-Seq）。除此外，其還可以利用RNA的5’端帽結構進行SMART建庫（SMART-Seq）。該酶的反應溫度為37-55°C，反應溫度為50°C。